C18 色譜柱原理、作用、維護(hù)及分析深度解析！
在現(xiàn)代液相色譜分析領(lǐng)域，C18 色譜柱憑借其卓越的性能和廣泛的適用性，成為實(shí)驗(yàn)室不可或缺的核心工具。以下將從原理、功能、維護(hù)保養(yǎng)及問題診斷等維度，對 C18 色譜柱進(jìn)行全面且深入的闡述。
一、C18 色譜柱分離核心原理
C18 色譜柱，全稱十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(Octadecylsilyl，簡稱 ODS 柱)，是反相高效液相色譜(RP – HPLC)體系中的經(jīng)典固定相。其分離機(jī)制的奧秘，源于固定相和流動(dòng)相之間獨(dú)特的相互作用。
固定相特性：以高純硅膠為基質(zhì)，通過化學(xué)鍵合的方式將十八烷基(C18?H37?)長鏈牢固地連接于硅膠表面，形成致密的疏水層。這層疏水結(jié)構(gòu)如同 “分子陷阱”，為非極性或弱極性化合物提供了特異性的結(jié)合位點(diǎn)。
流動(dòng)相組成：流動(dòng)相通常由水與有機(jī)溶劑(如甲醇、乙腈)按不同比例混合而成，整體呈現(xiàn)強(qiáng)極性。這種極性的流動(dòng)相環(huán)境，與固定相的疏水性形成鮮明對比，構(gòu)成了反相色譜分離的基礎(chǔ)條件。
分離機(jī)制：當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，不同極性的化合物會依據(jù)自身的化學(xué)性質(zhì)，在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行動(dòng)態(tài)分配。非極性或弱極性化合物與 C18 長鏈之間存在強(qiáng)烈的疏水相互作用，會被牢牢保留在固定相上，需要在流動(dòng)相的持續(xù)沖洗下，經(jīng)過較長時(shí)間才能被洗脫下來;而極性化合物與極性流動(dòng)相的親和力更強(qiáng)，難以與固定相的疏水層結(jié)合，因此會迅速隨流動(dòng)相向前移動(dòng)，率先流出色譜柱。此外，通過精心調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成比例(如采用梯度洗脫技術(shù)，逐步改變有機(jī)溶劑的濃度)，能夠精準(zhǔn)控制化合物的保留行為，實(shí)現(xiàn)對復(fù)雜混合物的高效分離。
二、C18 色譜柱的多元應(yīng)用場景
C18 色譜柱憑借其出色的分離性能，應(yīng)用在中藥/西藥檢測、計(jì)量實(shí)驗(yàn)室檢測、食品安全、生物分析、環(huán)境分析領(lǐng)域。
顯著優(yōu)勢：
廣泛的適用性：C18 色譜柱能夠兼容大多數(shù)有機(jī)化合物的分離分析，尤其是對非極性至中等極性物質(zhì)的分離效果極佳，幾乎涵蓋了化學(xué)、生物、醫(yī)藥等領(lǐng)域常見的分析對象。
出色的穩(wěn)定性：在 pH 2 – 8 的較寬范圍內(nèi)，C18 色譜柱能夠保持良好的化學(xué)穩(wěn)定性，可耐受多種流動(dòng)相體系，并且在長期使用過程中，仍能維持穩(wěn)定的分離性能，可靠性極高。
三、C18 色譜柱全周期維護(hù)策略
(一)日常使用規(guī)范
操作壓力控制：在使用過程中，務(wù)必避免色譜柱承受過高的壓力沖擊。無論是啟動(dòng)設(shè)備時(shí)流速的提升，還是分析結(jié)束后流速的降低，都應(yīng)采取緩慢、漸進(jìn)的方式，防止因壓力驟變導(dǎo)致固定相結(jié)構(gòu)受損、塌陷，從而影響色譜柱的分離性能和使用壽命。
樣品與流動(dòng)相預(yù)處理：為防止顆粒雜質(zhì)堵塞色譜柱，流動(dòng)相和樣品在使用前必須經(jīng)過嚴(yán)格過濾。通常選用 0.45 μm 或 0.22 μm 的濾膜進(jìn)行過濾處理，有效攔截可能存在的固體顆粒，確保色譜柱內(nèi)部流路暢通無阻。
pH 值精準(zhǔn)把控：由于 C18 色譜柱的硅膠基質(zhì)在極端 pH 條件下不穩(wěn)定，因此必須將流動(dòng)相的 pH 值嚴(yán)格控制在 2 – 8 的安全范圍內(nèi)。超出此范圍，硅膠基質(zhì)可能發(fā)生溶解，鍵合相也會出現(xiàn)水解現(xiàn)象，進(jìn)而導(dǎo)致柱效急劇下降，嚴(yán)重縮短色譜柱的使用壽命。
(二)清洗與再生方案
常規(guī)清洗流程：每次分析任務(wù)完成后，需立即對色譜柱進(jìn)行常規(guī)清洗。使用高比例的有機(jī)相(如 90% 甲醇或乙腈)，以適當(dāng)?shù)牧魉贈(zèng)_洗色譜柱 30 分鐘左右，將殘留在柱內(nèi)的強(qiáng)保留物質(zhì)徹底清除，為下一次分析做好準(zhǔn)備。
深度污染處理：當(dāng)色譜柱受到嚴(yán)重污染時(shí)，需采取針對性的處理措施。若污染物為脂類或蛋白質(zhì)，可使用異丙醇或四氫呋喃(THF)進(jìn)行反向沖洗，利用這些溶劑的強(qiáng)溶解能力，將頑固污染物從固定相表面洗脫下來;若存在無機(jī)鹽沉積問題，則應(yīng)先用純水沖洗，使無機(jī)鹽充分溶解，然后再逐步過渡到有機(jī)相，徹底清除殘留鹽分。
(三)長期儲存要點(diǎn)
當(dāng)色譜柱暫時(shí)不使用時(shí)，正確的儲存方法至關(guān)重要。應(yīng)將色譜柱儲存于純甲醇或乙腈等有機(jī)溶劑中，這些溶劑不僅能夠防止水分滋生微生物，污染色譜柱，還能使固定相保持良好的濕潤狀態(tài)。同時(shí)，務(wù)必將色譜柱兩端密封嚴(yán)實(shí)，避免溶劑揮發(fā)導(dǎo)致固定相干涸、干裂，從而永久性損壞色譜柱。
四、常見故障診斷與解決方案
(1)柱壓異常升高
潛在原因：篩板堵塞，阻礙流動(dòng)相正常通過:固定相被污染物覆蓋導(dǎo)致流路阻力增大;
解決方案：首先嘗試對色譜柱進(jìn)行反向沖洗，利用流動(dòng)相的反向流動(dòng)沖掉堵塞在篩板上的雜質(zhì);若效果不佳，可將篩板拆下進(jìn)行超聲清洗;若固定相污染嚴(yán)重，必要時(shí)更換新的色譜柱
(2)峰形嚴(yán)重拖尾
潛在原因：色譜柱長期使用后柱效下降，分離能力減弱;樣品溶劑與流動(dòng)相的性質(zhì)差異過大，導(dǎo)致樣品在柱內(nèi)的擴(kuò)散行為異常
解決方案：使用甲醇對色譜柱進(jìn)行活化處理，恢復(fù)其部分柱效;優(yōu)化樣品溶劑的選擇，盡量使樣品溶劑的性質(zhì)與流動(dòng)相相近，減少溶劑效應(yīng)的影響
(3)保留時(shí)間大幅漂移
潛在原因：流動(dòng)相的組成比例在運(yùn)行過程中發(fā)生變化;柱溫不穩(wěn)定，影響化合物的保留行為
解決方案：及時(shí)檢查輸液泵的比例閥，確保流動(dòng)相各組分的輸送準(zhǔn)確無誤;使用高精度的柱溫箱，保持柱溫恒定，避免溫度波動(dòng)對分離結(jié)果造成干擾
(4)基線噪音明顯增大
潛在原因：流動(dòng)相脫氣不充分，含有氣泡;檢測器受到污染，信號采集出現(xiàn)異常
解決方案：采用超聲脫氣、在線脫氣等方法對流動(dòng)相進(jìn)行充分脫氣處理;對檢測器的流通池進(jìn)行仔細(xì)清洗，去除污染物，恢復(fù)檢測器的正常工作狀態(tài)
五、色譜柱壽命延長技巧
使用恒譜生色譜保護(hù)柱：在分析柱前連接保護(hù)柱，保護(hù)柱的填料與分析柱相同或相似，能夠攔截樣品中的強(qiáng)保留雜質(zhì)和顆粒物質(zhì)，減少這些物質(zhì)對分析柱的污染和損害，從而顯著延長分析柱的使用壽命。
溫度閾值管控：C18 色譜柱的使用溫度不宜超過 60℃，高溫環(huán)境會加速鍵合相的降解過程，導(dǎo)致固定相流失，柱效降低。因此，在實(shí)驗(yàn)過程中，務(wù)必嚴(yán)格控制柱溫，避免因溫度過高對色譜柱造成不可逆的損傷。
定期性能評估：定期使用標(biāo)準(zhǔn)品(如萘、甲苯等)對色譜柱的性能進(jìn)行全面檢測，通過測定理論塔板數(shù)(N 值)、分離度、拖尾因子等關(guān)鍵指標(biāo)，及時(shí)掌握色譜柱的性能變化情況。若理論塔板數(shù)下降幅度超過 20%，則需立即對色譜柱進(jìn)行維護(hù)處理;若性能無法恢復(fù)，則應(yīng)考慮更換新的色譜柱，以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
發(fā)布于: 2023-08-28